DNA合成和純化系統(tǒng)使DNA合成的4個(gè)過程(合成、切除、脫保護(hù)及純化)自動完成。 丁量、自動地收集DNA產(chǎn)品。這些過程在3種同時(shí)運(yùn)行的換塊中完成。DNA合成所需的全部化學(xué)步驟都在合成柱內(nèi)進(jìn)行, 合成DNA所需要的全部試劑和溶劑都可以通過試劑運(yùn)輸系統(tǒng)供給。在柱子(起始載體結(jié)合的核苷是裝在一次性的柱子中, 該柱子除柱體外還有兩個(gè)固定過濾板和兩個(gè)接頭, 所有部件都是由惰性材料制成)中發(fā)生3個(gè)化學(xué)過程。
第一個(gè)過程發(fā)生在合成模塊中。柱中含有3'端核苷, 與載體物質(zhì)共價(jià)結(jié)合.一次加1個(gè)堿基到載體結(jié)合的核節(jié)上, DNA鏈就開始增長, 合成的粗寡核苷酸既可帶51-DMT基閉, 也可不帶5'-DMT基團(tuán). 而純寡核苷酸的合成必須帶5'-DMT基團(tuán)。在自動生產(chǎn)寡核苷酸的第二個(gè)過程中, 柱子被切換到切除模塊, 這里濃的氫氧化按溶液被輸送到柱內(nèi), 從載體上切除寡核苷酸, 然后將氫氧化按溶液中的DNA產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到脫保護(hù)模塊。
第三個(gè)過程是脫保護(hù), 將含寡核苷酸的溶液在65'C加熱1h以達(dá)到從寡核苷酸上去除掉保護(hù)基團(tuán)的目的。
第四個(gè)過程為純化模塊, 所希望獲得的全長寡核苷酸與失敗片段及其他雜質(zhì)分離。純化是將混懸在氫氧化銨溶液中脫保護(hù)的產(chǎn)物通過原來的柱內(nèi)的載體來完成。DMT化的全長寡核苷酸在柱內(nèi)結(jié)合到載體上, 而脫DMT的失敗片段和其他雜質(zhì)都被沖洗去掉,接著經(jīng)脫DMT后, 用20%的乙腈水溶液將DNA產(chǎn)物從柱上洗脫下來。
第三個(gè)過程是脫保護(hù), 將含寡核苷酸的溶液在65'C加熱1h以達(dá)到從寡核苷酸上去除掉保護(hù)基團(tuán)的目的。
第四個(gè)過程為純化模塊, 所希望獲得的全長寡核苷酸與失敗片段及其他雜質(zhì)分離。純化是將混懸在氫氧化銨溶液中脫保護(hù)的產(chǎn)物通過原來的柱內(nèi)的載體來完成。DMT化的全長寡核苷酸在柱內(nèi)結(jié)合到載體上, 而脫DMT的失敗片段和其他雜質(zhì)都被沖洗去掉,接著經(jīng)脫DMT后, 用20%的乙腈水溶液將DNA產(chǎn)物從柱上洗脫下來。
已純化的寡核若酸應(yīng)用UV(紫外線)檢測系統(tǒng), 在20%的乙腈溶液中進(jìn)行定量測定, 當(dāng)樣品輸送到樣品收集模塊時(shí)通過檢測器, 吸收以光密度單位(ODU)表示, 產(chǎn)量則以夜摩爾(pmole)表示。自動合成寡核苷酸是以樣品收集模塊(module)中收集DNA樣品完成。
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