（1）亞磷酰胺三酯法合成DNA     
       亞磷酰胺三酯法合成DNA片段， 已被DNA合成儀廣泛使用， 使得合成DNA片段成為一件非常簡單易行的工作． 亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的， 合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端， 相鄰的核苷酸通過3'-5'磷酸二酯鍵連接。
      第一步是將預(yù)先連接在固相載體上其活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯乙酸反應(yīng)， 脫去其5'一經(jīng)基的保護(hù)基團(tuán)DMT, 獲得游離的5'－羥基：
      第二步是合成DNA的原料（亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體）與活化劑四氮唑混合， 得到反應(yīng)活性很高的核苷亞磷酸活化中間體（它的3'端被活化， 5'-羥基仍然被DMT保護(hù)）， 與溶液中游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)， 這個(gè)反應(yīng)時(shí)間很快。
      第三步是帶帽反應(yīng)， 縮合反應(yīng)中可能有的極少數(shù)5'-羥基沒有參加反應(yīng)（合格的合成試劑縮合效率一定會(huì)大于98% ， 所以未參加反應(yīng)的少于2%, 合成過程使用乙酸酐和1-甲基咪嗤使這些核苷5'－輕基反應(yīng)形成酰， 終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng)， 這種短片段可以在純化時(shí)分離掉，這步反應(yīng)同樣是快速高效的。
     第四步，縮合后在氧化劑碘的作用下， 亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。經(jīng)過以上四個(gè)步驟， 一個(gè)脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的5'-羥基上的保護(hù)基團(tuán)OMT, 重復(fù)以上步驟， 直到所有要求合成的堿基被接去。

假設(shè)第一次寡核昔酸偶聯(lián)步驟（第二管）最后稀釋的DMT（二甲氧基三苯甲基，trityl)的吸收為X, 懸后一次偶聯(lián)（最后一管）最后稀釋的O MT吸收為Y, 則總產(chǎn)量＝Y(jié)/X。
（3）偶聯(lián)率