實(shí)時(shí)熒光定量PCR 由千應(yīng)用了光譜技術(shù), 與計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合有較多的優(yōu)點(diǎn), 敏感性大大提高。 與普通PCR 模式相比, 實(shí)時(shí)熒光PCR 具備以下幾個(gè)方面的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。
1)光譜技術(shù)與計(jì)算機(jī)技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用提高了靈敏度, 有效的減少了勞動(dòng)量。Taq ManPCR 使用特定波長的激發(fā)光來激發(fā)熒光的產(chǎn)生, 利用靈敏光探測(cè)器檢測(cè)熒光信號(hào)的大小, 通過計(jì)算機(jī)的分析軟件進(jìn)行分析, 靈敏度很高, 可以檢測(cè)到單拷貝的基因, 這是傳統(tǒng)PCR 難以做到的。
2) 由于擴(kuò)培產(chǎn)物的檢測(cè)在PCR 擴(kuò)增過程中同時(shí)進(jìn)行,并且數(shù)據(jù)的采集分析全部由儀器自動(dòng)完成, 因此整個(gè)檢測(cè)所需的時(shí)間比普通PCR 要節(jié)省許多。
3) 能有效避免污染。 傳統(tǒng)的PCR 在擴(kuò)增結(jié)束后需要電泳儀或紫外光下觀測(cè)結(jié)果,除了有污染外, 還對(duì)人體產(chǎn)生一定的傷害; 而熒光實(shí)時(shí)定魚PCR 在全封閉狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析, 有效地減少了污染對(duì)人體的傷害. 在大批量的標(biāo)本檢測(cè)中能有效地減少勞動(dòng)量。
4) 能精確定量。由于PCR 的平臺(tái)效應(yīng), 傳統(tǒng)的PCR 不能進(jìn)行精確的定量, 而熒光定量PCR, 由千利用擴(kuò)增進(jìn)入指數(shù)增長期的CT 值來定肚測(cè)拭起始模板的盤, 從而實(shí)現(xiàn)了極為精確的核酸定抵檢測(cè), 其精度可達(dá)每毫升100 拷貝.
5) 實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)功能強(qiáng)大, 具備定性、定織、突變、多項(xiàng)目等檢測(cè)功能. 而普通PCR 要完成上述項(xiàng)目需采用不同的技術(shù)平臺(tái)。實(shí)時(shí)熒光PCR 進(jìn)行定呈檢測(cè)時(shí), 其定量線性范圍比普通PCR 要寬得多, 可達(dá)每毫升100~1010 拷貝
實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀發(fā)展前景
隨著反應(yīng)試劑、儀器和操作系統(tǒng)的不斷發(fā)展和完善, 以實(shí)時(shí)熒光PCR 技術(shù)為核心的檢測(cè)試劑盒紛紛問世, 逐步趨向千呈現(xiàn)靈敏特異、快速稍確和操作自動(dòng)化的特點(diǎn)。當(dāng)然, 由于成本較高, 操作難度較大, 目前在臨床疾病的診斷和治療上還未得到普及. 因此, 如何進(jìn)一步提廟檢測(cè)方法靈敏度、簡化操作程序、縮短檢測(cè)時(shí)間、消除非特異干擾、以及采用統(tǒng)一的、標(biāo)準(zhǔn)化的方法已成為實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)試劑盒未來研究的主要方向。許多研究者趨向于將更多的精力投人實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法的研究開發(fā), 使之進(jìn)一步錄終自動(dòng)化, 來提尚臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在不久的將來, 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)將以其顯著的優(yōu)勢(shì)在分子生物學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué), 特別是在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域達(dá)到越來越廣泛的應(yīng)用。