高效液相色譜(十一): 液相色譜的分離模式之吸附色譜知多少!
液相色譜分離模式
吸附色譜(adsorption chromatography)
原理: 基于被測組分在固定相表面具有吸附作用,且各組分的吸附能力不同,使組分在固定相中產(chǎn)生保留和實現(xiàn)分離。
固定相: 固定相通常是活性硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固體吸附劑,所以吸附色譜也稱液固吸附色譜。活性硅膠最常用。
活性硅膠: 一種多孔性物質(zhì),因-O-Si(-O-)-O-Si(-O-)-O-結(jié)合而具有三維結(jié)構(gòu),表面具有硅羥基,作吸附劑的硅膠需經(jīng)加熱處理,除掉其表面吸附水,使之活化。按其孔徑分布分為表面多孔和全多孔兩類。硅膠既是吸附色譜最常用的固定相,也是分配色譜、離子色譜等色譜固定相的常用基質(zhì)。
流動相: 弱極性有機(jī)溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物,如正構(gòu)烷烴(己烷、戊烷、庚烷等)、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等等。
分離過程: 硅羥基呈微酸性,易與氫結(jié)合,是吸附的活性點。流動相溶劑在吸附劑表面形成單分子或雙分子吸附層,當(dāng)樣品分子進(jìn)入色譜柱,樣品主要靠氫鍵結(jié)合力吸附到硅羥基上,與流動相分子競爭吸附點。樣品分子反復(fù)地被吸附,又反復(fù)地被流動相分子頂替解吸,隨著流動相的流動而在柱中向前移動。因為不同的樣品分子在固定相表面的吸附能力不同,因而吸附-解吸的速度不同,各組分被洗脫的時間(保留時間)也就不同,使得各組分相互分離。
應(yīng)用: 吸附色譜在早期的HPLC中應(yīng)用得最多,現(xiàn)在,很多以前用吸附色譜分離的物質(zhì)被更方便和更有效的化學(xué)鍵合相反相分配色譜所代替。由于硅羥基活性點在硅膠表面常按一定幾何規(guī)律排列,因此吸附色譜用于結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離和族分離仍是最有效的方法。如農(nóng)藥異構(gòu)體分離、石油中烷、烯、芳烴的分離。
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