1、pH 值的影響

流動相的pH 值應(yīng)控制在２ ～ ７ 之間。當pH值大于７ 時可使硅膠載體溶解；當pH 值小于２ 時，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。當色譜系

統(tǒng)中需使用pH 值大于７ 的流動相時，應(yīng)選用耐堿的填充劑；當需使用pH 值小于２ 的流動相時，應(yīng)選用耐酸的填充劑。
2、緩沖鹽的水相溶液的影響

含有緩沖鹽的流動相應(yīng)盡可能少用，必須使用時，緩沖鹽的濃度應(yīng)盡可能低，否則容易阻塞管路。由于十八烷基鏈在純水相溶液中易產(chǎn)生彎曲，所以對于十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的反相色譜系統(tǒng)，流動相中水相溶液的比例通常應(yīng)低于９５％ ，否則C１８ 鏈的隨機彎曲將引起組分保留值變化，導(dǎo)致色譜系統(tǒng)的重現(xiàn)性很差。
3、流動相的組成比例、變化幅度的影響

流動相的成份不能隨意改變，但是比例可適當調(diào)整。每次調(diào)整流動相組成比例時，以組分比例較低者（小于或等于５０％ ）相對改變量不超過± ３０％且絕對改變量不超過± １０％ 為宜，如４０％ 相對改變量的數(shù)值超過３０％ 時，則絕對改變量以± １０％為宜。

1、 色譜柱篩板問題

篩板位于色譜柱的入口處，容易發(fā)生堵塞。篩板堵塞會產(chǎn)生柱壓升高、色譜峰拖尾、塔板數(shù)降低等問題。樣品中含有微粒是導(dǎo)致篩板堵塞的主要原因。因此，為了避免此類問題的發(fā)生，必須在進樣前將樣品過0.45μm 的濾膜。

強吸附性的樣品組分吸附在柱頭填料上，能嚴重地縮短色譜柱壽命。分析生物組織或體液（如血漿）的提取物、含油劑等復(fù)雜樣品時，這種滯留組分的影響尤其嚴重。色譜柱應(yīng)用中，色譜峰嚴重拖尾或分叉的出現(xiàn)往往是強保留污染物在柱頭吸附的體現(xiàn)。在進樣閥與色譜柱之間加／支保護性的小預(yù)柱，能夠有效減少強吸附組分對色譜柱的污染。小預(yù)柱通常為填充良好的1~2cm 的短柱，內(nèi)裝有與色譜柱相當?shù)奶盍稀Ｐ枰⒁獾氖切☆A(yù)柱必須定期更換。

常規(guī)樣品污染的硅膠基質(zhì)色譜柱，一般選用溶劑強度逐漸增大（極性逐漸減弱）的溶劑清沖洗，強疏水性的溶劑清洗非極性物質(zhì)，如脂類。最常用的方法是用２０ 倍柱體積（柱體積指色譜柱內(nèi)空腔體積，４.６x２５０mm 色譜柱的柱體積為４.２mL）的乙腈（或甲醇） ∶ 水＝ ９０ ∶ １０（V／V） → 乙腈→ 二氯甲烷→ 乙腈→ 乙腈（或甲醇） ∶ 水＝ ９０ ∶ １０ （V／V）沖洗色譜柱。需要注意的是在清洗和再生的過程中，需要保證每種清洗溶劑和下一種清洗溶劑互溶。當金屬離子污染色譜柱后，必須使用特殊的溶劑（磷酸和０.１mol／L 檸檬酸）清洗色譜柱，才能得到再生。

正相色譜柱的清洗與再生的方法與反相色譜柱相反，用極性逐漸增強的溶劑沖洗。常用的方法正己烷→ 異丙醇→ 二氯甲烷→ 甲醇→ 二氯甲烷→異丙醇→ 正己烷沖洗，每種溶劑不少于２０ 倍柱體積。