GPCR在細胞信號轉導中發(fā)揮重要作用，與人類疾病密切相關，是最大的藥物靶標蛋白家族，目前40%以上的上市藥物以GPCR為靶點。GPCR發(fā)揮的生理功能在很大程度上由其所激活的細胞內效應蛋白（G蛋白等）決定。根據其介導的下游信號通路，G蛋白可分為Gs、Gi、Go和Gq等類型，其中，Gs和Gi被GPCR活化后，分別激活和抑制腺苷酸環(huán)化酶，產生相反的生物學效應。研究表明，不同GPCR可選擇性激活一種或多種G蛋白，但一種GPCR如何識別不同類型的G蛋白一直未被清晰闡明，制約了對于G蛋白選擇調控機制的深入理解。
最近，上海藥物所研究員吳蓓麗和趙強聯合研究團隊及國內外合作者，通過多學科緊密合作，利用單顆粒冷凍電鏡技術，成功測定了胰高血糖素受體GCGR與其天然配體胰高血糖素以及Gs或Gi結合的兩個復合物結構。GCGR屬于B類GPCR家族，對于維持人體血糖穩(wěn)態(tài)發(fā)揮關鍵作用，是治療2型糖尿病藥物的重要靶點。GCGR主要通過激活Gs蛋白行使其功能，但越來越多的研究表明，該受體也可與Gi和Gq等其他類型的G蛋白作用，產生不同的生物學效應，體現了GPCR信號轉導過程的復雜性和多樣性。
2017年以來，上海藥物所研究團隊合作陸續(xù)解析了GCGR全長蛋白分別與小分子抑制劑和多肽激動劑結合的復合物晶體結構，極大地促進了對B類GPCR信號識別和調控機制的認識。此次，該科研團隊乘勢而為，進一步測定了GCGR與不同效應蛋白復合物的三維結構，對于全面闡釋該受體蛋白的信號轉導機制具有重要意義。
基于以往的GPCR結構研究，人們普遍認為GPCR通過調節(jié)第六跨膜螺旋（TM6）向外遷移的幅度改變其G蛋白結合口袋的大小，實現與不同類型G蛋白的結合。與這一傳統(tǒng)認知不同，GCGR-Gs和GCGR-Gi復合物結構顯示，GCGR以一個相似的G蛋白結合口袋與這兩種功能相反的G蛋白結合。與已經解析的A類GPCR與G蛋白的復合物結構相比，GCGR的G蛋白結合口袋開口更大，不僅可以滿足體積較大的Gs蛋白的結合，而且能夠容納體積較小的Gi蛋白，這種利用相似結合口袋識別不同G蛋白的分子機制可大大提高GPCR激活多條下游信號通路的效率。這一發(fā)現極大地深化了人們對GPCR信號轉導機制的認識。
雖然與Gs和Gi結合時，GCGR形成的G蛋白結合口袋大小相似，但其與兩種G蛋白的相互作用模式差異巨大。GCGR與Gs相互作用界面的面積是其與Gi作用界面的兩倍，使得該受體與Gs的親合力高于Gi，這為GCGR主要通過Gs進行信號轉導提供了結構基礎。此外，研究發(fā)現，在這兩個復合物結構中，受體分子胞內側環(huán)區(qū)（Intracellular loop，ICL）存在較大的構象差異，三個胞內環(huán)（ICL1-3）在與不同G蛋白結合時發(fā)揮著不同的作用。其中，第二胞內環(huán)（ICL2）的構象差異最為顯著，該區(qū)域與Gs緊密結合；而受體與Gi結合時，ICL2向受體一側偏移，僅與Gi形成微弱的相互作用。
該合作攻關團隊綜合利用氨基酸突變、G蛋白激活和細胞信號轉導等研究手段，針對GCGR與G蛋白作用界面上的數十個關鍵氨基酸進行檢測，研究它們對Gs和Gi活化的影響。實驗結果表明，GCGR的ICL2和第七跨膜螺旋與第八螺旋之間的連接區(qū)域對于識別Gs蛋白發(fā)揮關鍵作用，而受體的另外兩個胞內環(huán)（ICL1和ICL3）和G蛋白結合口袋內的疏水氨基酸則對于結合Gi蛋白至關重要。這是首次在一種GPCR分子中明確不同類型G蛋白的識別關鍵區(qū)域，對于深入研究G蛋白的選擇性調控機制意義重大。此外，這些發(fā)現為偏向性配體藥物的設計提供了重要依據：通過選擇性抑制其中一種效應蛋白的活化，有效降低藥物副作用，將推動抗2型糖尿病藥物的研發(fā)。
該研究論文的第一作者是上海藥物所博士喬安娜和韓碩、生物物理所研究生李新美、復旦大學藥學院研究生李志鑫和澳大利亞莫納什大學博士趙佩珅；該項目的主要合作者還包括莫納什大學教授Patrick M. Sexton、上海藥物所研究員王明偉、楊德華以及丹麥諾和諾德公司博士Steffen Reedtz-Runge等。該研究得到科技部、國家自然科學基金委員會、中科院、上海市科學與技術發(fā)展基金和澳大利亞國家健康與醫(yī)學研究委員會等的資助。
