色譜柱的柱效能是評價色譜性能的一項重要指標(biāo),混合物能否在色譜柱中得到分離,除取決于選擇合適的固定相外,還與色譜操作條件及色譜柱的裝填狀況等因素有關(guān)。在一定的色譜操作條件下,色譜柱的柱效可用理論塔板數(shù)或理論塔板高度來衡量。一般說來塔板數(shù)愈多,或塔板高度愈小,色譜柱的分離效能愈好。
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提高液相色譜柱效的方法
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。 以下介紹了幾種國際上流行的測量和計算柱效值的方法。
1、提高液相色譜柱柱效的方法
要提高液相色譜的效率可從以下幾方面入手。
(1)降低移動相的流速,但會使分析時間延長。
(2)減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小。
(3)減小固定相的顆粒度,但不能過分,過分后色譜柱的滲透率也會減小。
(4)選用低粘度的移動相,以利于快速傳質(zhì),但卻不利于多組份分析。
(5)適當(dāng)提高柱溫,可降低移動相的粘度,但柱效和分離度也隨之降低。
(6)盡量減小停滯移動相的體積,但卻加快了移動相的流速。
從以上介紹可看出,在色譜分析過程中,各種因素是互相聯(lián)系和制約的。只有通過對柱效值的跟蹤測算,對自己分析方法不斷的研究和實踐,才能找到最佳的工作條件。
2、對柱效值進(jìn)行跟蹤測算應(yīng)注意的問題
我們也應(yīng)記住柱效值并不足以預(yù)測在所有條件下的柱性能,對大多數(shù)色譜工作者來說,柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力,而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。
不管用什么特定的測試方法,都會有幾個參數(shù)影響柱效的測定。這些參數(shù)包括:洗脫液的成分和粘度及其線流速,測定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度、柱長、填料裝填方式、顆粒度、還有所選用的測量和計算方法。而測量和計算方法對柱效值的確定起著極大的作用。
3、幾種測量和計算柱效值的方法
因為色譜峰是假定樣品濃度在移動相和固定相中呈正態(tài)分布而得到的樣品譜帶分布,故常常把色譜峰型看作正態(tài)曲線來計算理論塔板數(shù)。因此計算柱效(以理論塔板數(shù)n為單位)的公式習(xí)慣上定義為:
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式中tR為色譜峰的保留時間;
σ2是以時間為單位測量色譜峰的偏差;
a是和峰高(從測峰寬的基線量起)有關(guān)的常數(shù);
ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點與色譜峰兩側(cè)拐點處做切線與峰底基線相交兩點間的距離。
假如一個色譜峰真是正態(tài)峰型,那么每種計算方法都會得到同樣的結(jié)果。然而即使一些比較理想的儀器和傾向于得到對稱峰型的溶質(zhì),由于柱內(nèi)的槽或空隙,也會出現(xiàn)非正態(tài)峰型。所以不同的計算方法將會得到相差較大的n值。通常偏離正態(tài)模型的峰型表示為“前延”或“拖尾”。對于這些峰型,越在峰的高處測量,計算的理論塔板數(shù)值就越大(準(zhǔn)確性越低)。
在許多情況下,色譜工作者需要能反映整個峰型(包括拖尾)的柱效值,同時為了保證定量的重復(fù)性,也需要色譜峰很好的對稱性。這時對色譜峰非對稱性最敏感的計算方法最適合。如果目的僅僅是要監(jiān)測色譜柱從第一次使用到使用壽命結(jié)束這一過程中的柱效,那么以上任何一種方法都可以,應(yīng)選擇最簡便的方法。
提高柱效的實用小妙招
1)一般柱效不好,先排除其他問題,都沒有問題的話就是柱子不行了。
2)如果柱子比較老,可以反過來小流速沖洗一下,我做過效果很好?。▋H適用舊柱子啊,有點風(fēng)險)。
3)把柱頭變色的填料挖掉,用同類新的填料填充好,效果很好。
4)正向沖洗色譜柱、反向沖洗色譜柱、超聲清洗色譜柱篩板、如果是柱內(nèi)死體積增加則需更換新柱。
5)色譜柱是消耗品,理論來說,柱效很低的色譜柱是沒得救的,但是有一招,也就是當(dāng)你發(fā)現(xiàn)色譜柱沒得救的時候可以用一下,就是反沖色譜柱,但是你要注意的是,流速不要設(shè)置太大,這樣的話還能再堅持一會。如果這樣也沒用的話,你就重新買吧。
6)如果柱子真的很老舊了,就反相沖洗試試,可能還能用一段時間,但不會太久。在然后就只能換填料了,或換新的柱子。
7)我們前段時間也是柱效不好,其他都比較正常。后來把柱子重新活化了一下,柱效由原來的兩千升到四千多了。不過維持了一個月又不行了。