流動(dòng)相應(yīng)選擇乙腈&甲醇

作為實(shí)驗(yàn)室試劑中不可或缺的存在，乙腈都有什么用途？乙腈能為色譜分析帶來哪些好處？和甲醇相比，其優(yōu)勢(shì)是什么？

色譜乙腈的應(yīng)用


色譜乙腈是指用于色譜分析、色譜分離、色譜制備的乙腈試劑

高效液相色譜（HPLC）分析中，流動(dòng)相溶劑的純度和質(zhì)量對(duì)分析結(jié)果和儀器本身都有重要影響。

溶劑中的各種痕量雜質(zhì)不僅會(huì)造成較高的基線和鬼峰，進(jìn)而影響定性定量分析結(jié)果，而且可能會(huì)污染分離柱和堵塞系統(tǒng)，造成儀器出現(xiàn)故障。

了解HPLC溶劑規(guī)格和相關(guān)的測(cè)試方法，可以幫助HPLC 用戶評(píng)價(jià)和篩選HPLC溶劑，減少溶劑雜質(zhì)對(duì)應(yīng)用造成的負(fù)面影響。

最常用的有機(jī)流動(dòng)相組分

乙腈區(qū)別于其他HPLC溶劑的獨(dú)特性質(zhì)（中等洗脫能力、強(qiáng)溶解能力、能夠得到明確的色譜峰、低粘度、相對(duì)于醇類和酯類有較低的UV吸收），使其成為最常用的有機(jī)流動(dòng)相組分。乙腈一般是（由氨和丙烯）大規(guī)模生產(chǎn)丙烯腈的副產(chǎn)物。其中可能含有多種很少量的雜質(zhì)（例如丙烯腈、α(β)-甲基丙烯腈、順/反式丁烯腈、乙醛、丙酮、甲醇、乙基氰化物、丙烯醛、烯丙醇、丙烯酸、惡唑和乙酸）。

經(jīng)過復(fù)雜的純化過程，痕量的上述雜質(zhì)可能仍然存在于HPLC級(jí)乙腈中。其中一些雜質(zhì)不僅會(huì)造成較高的基線和鬼峰，進(jìn)而影響定性定量分析，而且會(huì)污染分析柱、堵塞系統(tǒng)，導(dǎo)致儀器出現(xiàn)故障。

HPLC乙腈UV吸收值的判斷

UV吸收背景對(duì)HPLC乙腈的關(guān)鍵性源于兩個(gè)原因。首先，大部分有機(jī)雜質(zhì)都會(huì)產(chǎn)生UV吸收。乙腈的UV吸收越小意味著其中雜質(zhì)含量越少。第二，HPLC儀器最常用的檢測(cè)模式就是UV檢測(cè)。因此乙腈的UV吸收越小，色譜的基線背景越低；從而靈敏度越高，檢測(cè)限越低。

乙腈、甲醇大比拼

有時(shí)單用ACN或MEOH可能會(huì)達(dá)不到理想的分離效果，在流動(dòng)相同時(shí)使用ACN和MEOH可改變選擇性以獲得較好的分離效果。

簡(jiǎn)言之，在改變分離選擇性的時(shí)候，甲醇細(xì)調(diào)，乙腈粗調(diào)。主要是為了調(diào)整流動(dòng)相的粘度和強(qiáng)度，使得分離效果和選擇性有所改善。

基于溶劑不同的選擇性，甲醇為類質(zhì)子溶劑，可形成氫鍵，對(duì)于分離酸堿或電負(fù)性強(qiáng)的化合物有提高選擇性，乙腈為極性分子，其碳氮三鍵含有未成鍵電子，能與含有空軌道的化合物結(jié)合，則與甲醇有著不同的化合物選擇性。

在反相色譜中，你可以把色譜過程想像為流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑是從固定相層上把溶質(zhì)給“萃取”下來的，再聯(lián)想“相似相溶原理”，你就能夠理解分離化合物中流動(dòng)相的種類對(duì)分離結(jié)果的改變情況了。

乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí)，乙腈的洗脫能力強(qiáng)。特別是混合比率低時(shí)，從咖啡因和苯酚的洗脫來看，獲得同樣的保留時(shí)間，乙腈的比率，只需甲醇的比率的一半以下即可。

首先，乙腈價(jià)格高，特別是HPLC級(jí)的價(jià)格很高，但為啥文獻(xiàn)中的條件，多用乙腈呢？

1、吸光度。

乙腈HPLC級(jí)吸光度值低。乙腈和甲醇的市銷HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)的吸收光譜中，乙腈HPLC吸收最?。ㄌ貏e是在短波長(zhǎng)上小）。所謂HPLC級(jí)是除去具有吸收UV的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長(zhǎng)上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測(cè)時(shí)，產(chǎn)生的噪聲小，因此在進(jìn)行UV短波長(zhǎng)上的高靈敏度分析時(shí)乙腈HPLC級(jí)最適宜。

另外，在UV檢測(cè)中的梯度基線上也是乙腈HPLC級(jí)產(chǎn)生鬼峰少，雖然，其他與水相溶性高的有機(jī)溶劑有各種各樣，但很難能找到比乙腈HPLC級(jí)吸收更小的。另外，甲醇的HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)，雖然所得的光譜相差不大，但是優(yōu)級(jí)不能保證吸光度，有可能產(chǎn)生偏差，價(jià)格也相差不大，所以盡量使用HPLC級(jí)。

2、壓力。

根據(jù)有機(jī)溶劑的種類或混合比率的不同而異，水/乙腈，水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合，壓力增高，而乙腈同樣與水混合壓力較低。所以，乙腈在同樣的流速下不在柱內(nèi)增加多余的壓力。

3、流動(dòng)相的脫氣。

乙腈類要注意混合溶劑的制備，在流動(dòng)相瓶?jī)?nèi)進(jìn)行時(shí)(等濃度系統(tǒng))，甲醇與水混合時(shí)發(fā)熱，多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?脫氣容易)；而乙腈由于吸熱冷卻，隨著慢慢回到室溫，產(chǎn)生氣泡，所以要考慮脫氣(加溫?cái)嚢?，過濾膜，He脫氣等。

4、分離(洗脫)的選擇性。

乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同。由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性，乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致。因此，在用乙腈類不能獲得分離的選擇性，就試用甲醇類看看。

5、峰形。

像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等，用乙腈類時(shí)拖尾嚴(yán)重，用甲醇類可抑制?？墒牵话闱闆r下，聚合物類反相柱，與硅膠柱相比，更具有峰形寬的傾向，特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物時(shí)常見。這在流動(dòng)相使用甲醇時(shí)非常明顯，而用乙腈時(shí)不明顯。為此，用聚合物類反相用柱時(shí)建議采用后者(乙腈類)，這是因?yàn)橐译媸鼓z膨潤(rùn)。

6、洗脫能力。

乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí)，一般情況下，乙腈的洗脫能力強(qiáng)。特別是混合比率低時(shí)，從咖啡因和苯酚的洗脫來看，獲得同樣的保留時(shí)間，乙腈的比率，只需甲醇的比率的一半以下即可。

另一方面，有機(jī)溶劑100%或與此極接近時(shí)，從胡蘿卜素和膽甾醇來看，常常都是甲醇的洗脫能力強(qiáng)?；旌媳仍?0比1等較為特殊時(shí)，調(diào)制的誤差大，影響保留時(shí)間，或平衡化的時(shí)間長(zhǎng)，乙腈遇到這種情況時(shí)，用甲醇的10比1混合代替乙腈，操作方便些。溶劑受溫度影響時(shí)，不采用容器定量，而采用重量的方法(考慮比重)，可使混合比的誤差減小。

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