溶劑效應(yīng)在液相色譜中的影響
樣品溶液的溶劑強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度時(shí)可能會(huì)造成的峰展寬、峰分叉現(xiàn)象。
現(xiàn)象:色譜圖上較早洗脫的峰扭曲變形或者開(kāi)叉,與此同時(shí)較晚洗脫的峰則較為尖銳與對(duì)稱(chēng),這些現(xiàn)象顯示一個(gè)比較特殊的起因――樣品溶液的溶劑很可能強(qiáng)于流動(dòng)相。例如樣品溶液的溶劑是100%乙腈(100%的強(qiáng)溶劑),而流動(dòng)相的組成則較弱,18%的乙腈與72%的水。第一個(gè)峰是開(kāi)叉的,并且與第二個(gè)峰相比,明顯地變寬了。當(dāng)樣品溶液的溶劑變成流動(dòng)相時(shí),所有的峰形都改善了,且變得尖銳。
解釋?zhuān)寒?dāng)樣品進(jìn)樣時(shí),有可能出現(xiàn)峰展寬,最佳的樣品溶液組成和體積將會(huì)保持在10%甚至更低,在這個(gè)例子里,當(dāng)樣品溶劑與流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度不同時(shí),換句話(huà)來(lái)說(shuō),也就是樣品未用流動(dòng)相溶解,因此,有些樣品分子溶解在強(qiáng)溶劑(100%ACE),并隨強(qiáng)溶劑流過(guò)柱子,而有些則溶解在流動(dòng)相中,從而導(dǎo)致峰分叉。
當(dāng)樣品與流動(dòng)相強(qiáng)度相差較小,進(jìn)樣影響也會(huì)小,第一個(gè)峰可能會(huì)寬于第二個(gè)峰,而當(dāng)這種展寬導(dǎo)致必要的分離度降低時(shí),這樣情況應(yīng)引起注意,例如使用一根短柱,和5UL進(jìn)樣,這與最佳進(jìn)樣體積4UL相近,用了極性更強(qiáng)的溶劑導(dǎo)致分離度明顯的降低。
避免的方法:盡量用流動(dòng)相來(lái)溶解樣品,對(duì)于梯度洗脫,采用初始的流動(dòng)相比例。對(duì)于在流動(dòng)相中溶解度小,必須用強(qiáng)溶劑的時(shí)候,減少進(jìn)樣體積以消除溶劑效應(yīng)的影響。
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