高效液相色譜
與氣相色譜相比液相色譜的優(yōu)點(diǎn) :與氣相色譜法相比,液相色譜法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性及相對(duì)分子質(zhì)量的限制,只要求把樣品制成溶液即可,非常適合于分離生物大分子、離子型化合物,不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物以及其他各種高分子化合物等。此外,液相色譜的流動(dòng)相不僅起到使樣品沿色譜柱移動(dòng)的作用,而且與固定相一樣,與樣品分子發(fā)生選擇性的相互作用,這就為控制和改善分離條件提供了一個(gè)額外的可變因素。而氣相色譜法采用的流動(dòng)相是惰性氣體,對(duì)組分沒有親和力,僅起運(yùn)載作用。
液相色譜特點(diǎn) :高壓、高速、高效、高靈敏度、高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。
高效液相相色譜儀的組成 :高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
進(jìn)樣系統(tǒng) 要求 :良好的密封性,最小的死體積,最好的穩(wěn)定性,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)壓力、流量影響較小。
分離系統(tǒng):色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件。由柱管和固定相組成。柱管為直型不銹鋼管。一般色譜柱長5~30 cm,內(nèi)徑4~5 mm,凝膠色譜柱內(nèi)徑3~12 mm,而制備色譜柱內(nèi)徑則可達(dá)25 mm。一般淋洗溶劑在進(jìn)入色譜分離柱之前,先通過前置柱。HPLC柱的填料顆粒粒徑一般約為3~10 ?m,填充常采用勻漿法。色譜柱的發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。
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高效液相色譜
9 檢測系統(tǒng) :作用——用來連續(xù)監(jiān)測經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。紫外-可見吸收檢測器、光電二極管陣列檢測器、示差折光檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器。
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